蛋白定量檢測(cè)試劑用于測(cè)定不同樣本中蛋白質(zhì)濃度

更新時(shí)間：2025-06-20 點(diǎn)擊次數(shù)：1109

　　蛋白定量檢測(cè)試劑是用于測(cè)定不同樣本中蛋白質(zhì)濃度的工具，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、臨床診斷等領(lǐng)域。以下是關(guān)于蛋白定量檢測(cè)試劑的詳細(xì)說(shuō)明，包括其類型、原理、應(yīng)用場(chǎng)景及注意事項(xiàng)：

　　1. 常見(jiàn)蛋白定量檢測(cè)方法

　　考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）：

　　原理：考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后發(fā)生顏色變化，在595 nm處有特征吸收峰，吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。

　　特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、快速，靈敏度高，但受干擾物質(zhì)影響較大。

　　適用樣本：純化蛋白質(zhì)、裂解物、血清、血漿等。

　　二喹啉甲酸（BCA）法：

　　原理：在堿性條件下，蛋白質(zhì)與Cu2+反應(yīng)生成Cu1+，后者與BCA試劑形成紫色絡(luò)合物，吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。

　　特點(diǎn)：抗干擾能力強(qiáng)（對(duì)去污劑、甘油耐受性較好），靈敏度稍低于Bradford法，但更穩(wěn)定。

　　適用樣本：復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物、細(xì)胞裂解液、血清/血漿等。

　　紫外吸收法（Lowry法）：

　　原理：蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸在280 nm處有特征吸收峰，通過(guò)吸光度計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。

　　特點(diǎn)：無(wú)需試劑，但受核酸、多肽等干擾，靈敏度較低。

　　適用樣本：純化蛋白質(zhì)、無(wú)核酸污染的樣品。

　　比濁法（如Peterson法）：

　　原理：蛋白質(zhì)在酸性條件下與酚類物質(zhì)反應(yīng)生成有色復(fù)合物，吸光度與濃度相關(guān)。

　　特點(diǎn)：靈敏度高，但操作復(fù)雜，易受干擾。

　　熒光法（如熒光染料標(biāo)記法）：

　　原理：熒光染料（如FITC、熒光素）與蛋白質(zhì)結(jié)合后發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度相關(guān)。

　　特點(diǎn)：靈敏度高，適合低濃度蛋白檢測(cè)，但需要熒光檢測(cè)儀。

　　2. 蛋白定量檢測(cè)試劑應(yīng)用場(chǎng)景：

　　純化蛋白質(zhì)定量：

　　用于評(píng)估蛋白質(zhì)純化過(guò)程中的產(chǎn)量和純度。

　　推薦方法：Bradford法或BCA法。

　　細(xì)胞裂解物定量：

　　測(cè)定細(xì)胞裂解液中的總蛋白質(zhì)濃度，用于后續(xù)電泳、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)。

　　推薦方法：BCA法（抗去污劑干擾）。

　　血清/血漿定量：

　　測(cè)定血液中的蛋白質(zhì)濃度，用于臨床診斷或研究。

　　推薦方法：BCA法或紫外吸收法。

　　復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物定量：

　　如組織勻漿、體液等復(fù)雜樣本中的蛋白質(zhì)定量。

　　推薦方法：BCA法（抗干擾能力強(qiáng)）。

　　稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)曲線：

　　通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（如BSA）制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算未知樣本的蛋白質(zhì)濃度。